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**組化操作流程

日期：2025-06-17 05:10
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摘要： （一）、儀器設備 1. 18cm不鏽鋼高壓鍋或電爐或用微波爐. 2. 水浴箱 （二）、試 劑 1. PBS緩衝液（pH7.2―7.4） 2．0.01mol/L檸檬酸鈉緩衝液（CB,pH6.0,1000ml 3．0.5mol/L EDTA緩衝液（pH 8.0） 4. 1mol/L的TBS緩衝液（pH 8.0） 5. 酶消化液：a.0.1%胰蛋白酶 b.0.4%胃蛋白酶液 6. 3%甲醇―H2O2溶液 7. 風裱劑：a. 甘油和0.5mmol/L碳酸鹽緩衝液（pH 9.0–9.5）等量混合b油和TBS(PBS)配製 8．TBS/PBS pH 9.0–9.5,適用於熒光纖維鏡標本; pH 7.0-7.4適合光學纖維標本 （三）、...
（一）、儀器設備
  1. 18cm不鏽鋼高壓鍋或電爐或用微波爐.
  2. 水浴箱
（二）、試 劑
  1. PBS緩衝液（pH7.2―7.4）
  2．0.01mol/L檸檬酸鈉緩衝液（CB,pH6.0,1000ml
  3．0.5mol/L EDTA緩衝液（pH 8.0）
  4. 1mol/L的TBS緩衝液（pH 8.0）
  5. 酶消化液：a.0.1%胰蛋白酶  b.0.4%胃蛋白酶液
  6. 3%甲醇―H2O2溶液
  7. 風裱劑：a. 甘油和0.5mmol/L碳酸鹽緩衝液（pH 9.0–9.5）等量混合b油和TBS(PBS)配製
  8．TBS/PBS pH 9.0–9.5,適用於熒光纖維鏡標本; pH 7.0-7.4適合光學纖維標本
（三）、操作流程
  1、脫蠟和水化
   脫蠟前應將組織芯片在室溫中放置60分鐘或60℃恒溫箱中烘烤20分鐘。
  a 組織芯片置於二甲苯中浸泡10分鐘,更換二甲苯後再浸泡10分鐘
  b 無水乙醇中浸泡五分鐘
  c 95%乙醇中浸泡五分鐘
  d 75%乙醇中浸泡五分鐘
  2、抗原修複
   用於福爾馬林固定的石蠟包埋組織芯片：
  A 抗原熱修複
  a 高壓熱修複 在沸水中加入EDTA(pH8.0)或0.01mmol/L枸櫞酸鈉緩衝溶液（pH6.0）.蓋上不鏽鋼鍋蓋，但不能鎖定。將玻片置於金屬染色加上，緩慢加壓，是玻片在緩衝液中浸泡五分鐘，然後將蓋子鎖定，小閥門將會升起來。10分鐘後除去熱源，置入涼水中，當小閥門沉下去後打開蓋子。此方法適用於較難檢測或核抗原的抗原修複。b沸熱修複 電爐或水浴鍋加熱0.01枸櫞酸鈉緩衝液（pH 6.0）至95℃左右，放入組織芯片加熱10-15分鐘。 c微波爐加熱在微波爐裡加熱0.01枸櫞酸鈉緩衝液（pH6.0）至沸騰後將組織芯片放入，斷電，間隔5-10分鐘，反複1-2次。適用的抗原：Bcl-2.Bax.AR.PR.C-fos.x-jum.z-kit.c-myc.E-cadherin.ChromograninA.Cyclin.ER.Heatshock.Protein.HPV.Ki-67.MDMZ.P53.P34.P15.P-glycoprotein.PKC.PCNA.ras.Rb.等
   B 酶消化方法
   在抗原酶消化修複中，常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前預熱37℃，消化時間約為5-30分鐘。適用於被固定遮蔽的抗原：包括 Collagen.GFAP. Complement.Cytokeratin.C-erB-2.LCA.LN.等
   3、**組化染色SP法
  （1） 脫蠟、水化
  （2）PBS洗2-3次各5分鐘
  （3）3% H2O2(80%甲醇)滴加在TMA上，室溫靜置10分鐘
  （4）PBS洗2-3次各5分鐘
  （5）抗原修複
  （6）PBS洗2-3次各5分鐘
  （7）滴加正常山羊血清封閉液，室溫20分鐘，甩去多餘液體
  （8）滴加Ι抗50μl,室溫靜置1小時或4℃過夜或37℃1小時
  （9）4℃過夜後需在37℃複溫45分鐘
  （10）PBS洗3次每次2分鐘
  （11）滴加Ⅱ抗45-50μl,室溫靜置或37℃1小時
  （12）Ⅱ抗中可加入0.05%的 tween-20.
  （13）PBS洗3次各5分鐘
  （14）DAB顯色5-10分鐘，在顯微鏡下掌握染色程度
  （15）PBS或自來水衝洗10分鐘
  （16）蘇木精複染2分鐘，鹽酸酒精分化
  （17）自來水衝洗10-15分鐘
  （18）脫水、透明、封片、鏡檢。
  4、SABC法
  （1） 脫蠟、水化
  （2）PBS洗2次各5分鐘
 （3）用蒸餾水或PBS配製新鮮的3%H2O2，室溫封閉5-10分鐘，用蒸餾水洗3次
  （4）抗原修複
  （5） PBS洗5分鐘  
  （6）滴加正常山羊血清封閉液，室溫20分鐘，甩去多餘液體
  （7）滴加Ι抗50μl,室溫靜置1小時或4℃過夜或37℃1小時
  （8）PBS洗3次各2分鐘
  （9）滴加生物素化Ⅱ抗，20℃-37℃ 20分鐘
  （10）PBS洗3次各2分鐘
  （11）滴加試劑SABC 20℃-30℃ 20分鐘
  （12） PBS洗4次各5分鐘
  （13） DAB顯色：試劑盒或自配顯色劑顯色
  （14）脫水、透明、封片、鏡檢。
 
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