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使用ProtoGel30%進行電泳實驗的使用及配比說明

日期：2025-04-30 14:11
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摘要： ProtoGel 30% 丙烯酰胺：甲叉丙烯酰胺：37.5:1 純穩定的溶液 SDS-PAGE電泳實驗的方法 1.Laemmli SDS-PAGE凝膠配方 使用下表來確定配置不同百分比凝膠需要的試劑量。如果您電泳的凝膠百分比未包括在該表中，使用下麵的公式來計算ProtoGel、ProtoGel配套的緩衝液以及其他試劑的需要量。 常用凝膠百分比中各溶液成分的量 使用預混的4X Resolving Buffer 或 1.5 M Tris-HCl ...
 ProtoGel  30%

丙烯酰胺：甲叉丙烯酰胺：37.5:1

純穩定的溶液

 

SDS-PAGE電泳實驗的方法

1.Laemmli SDS-PAGE凝膠配方

使用下表來確定配置不同百分比凝膠需要的試劑量。如果您電泳的凝膠百分比未包括在該表中，使用下麵的公式來計算ProtoGel、ProtoGel配套的緩衝液以及其他試劑的需要量。

常用凝膠百分比中各溶液成分的量

使用預混的4X Resolving Buffer 或 1.5 M Tris-HCl

凝膠%

4X Resolving Buffer

1.5 M Tris-HCl

6%

 ProtoGel 30%: 20.0ml

 4X Resolving Buffer: 25.0ml

 去離子水: 53.9ml

ProtoGel 30%:  20.0ml

1.5 M Tris-HCl, pH 8.8:  25.0ml

10% SDS:   1.0ml

去離子水:  52.9ml

8%

ProtoGel 30%: 26.7ml

 4X Resolving Buffer: 25.0ml

 去離子水: 47.2ml

ProtoGel 30%:  26.7ml

1.5 M Tris-HCl, pH 8.8:  25.0ml

10% SDS:   1.0ml

          去離子水:  46.2ml

10%

ProtoGel 30%: 33.3ml

 4X Resolving Buffer: 25.0ml

 去離子水: 40.6ml

ProtoGel 30%:  33.3ml

1.5 M Tris-HCl, pH 8.8:  25.0ml

10% SDS:   1.0ml

          去離子水:  39.6ml

12%

ProtoGel 30%: 40.0ml

 4X Resolving Buffer: 25.0ml

 去離子水: 33.9ml

ProtoGel 30%:  40.0ml

1.5 M Tris-HCl, pH 8.8:  25.0ml

10% SDS:   1.0ml

          去離子水:  32.9ml

15%

ProtoGel 30%:50.0ml

 4X Resolving Buffer: 25.0ml

 去離子水: 23.9ml

ProtoGel 30%:  50.0ml

1.5 M Tris-HCl, pH 8.8:  25.0ml

10% SDS:   1.0ml

          去離子水:  22.9ml

 

·         注：ProtoGel Resolving Buffer的使用量總是一樣的，無論凝膠中單體的百分比是多少（每100ml凝膠灌製液中固定添加25mlProtoGel Resolving Buffer）。

配置任何體積濃度的凝膠灌製液中所需ProtoGel的量都可以由下列公式計算：

Vp =(X) (Vt)/30

這裡，Vp = 30% ProtoGel的量，X = 凝膠中所需的單體的百分比，Vt = 灌製液的總量

比如：製作100ml單體10%的凝膠，計算要添加的ProtoGel的量如下所示：

Vp = (10) (100)/30 = 33.3 ml

2.添加引發劑和灌製膠

為了達到好的實驗效果，在使用引發劑APS以及TEMED之前花10分鐘真空脫除凝膠溶液中的氣體。每100ml灌製液加入1.0ml10%（W/V）的過硫酸胺輕搖混合，之後每100ml灌製液加入0.1ml的TEMED輕搖混合，將溶液傾入凝膠灌製盒中，凝膠應該在10-20分鐘之間開始凝固。為了避免形成不平的界麵，在聚合凝固之前加入正丁醇飽和的水溶液壓平界麵。在灌製濃縮膠（具體操作見下一節）之前，用水將丁醇衝洗掉。

3.灌注濃縮膠

使用ProtoGel Stacking Buffer配製10ml4%的濃縮膠：ProtoGel: 1.3ml，ProtoGel Stacking Buffer:  2.5ml，去離子水: 6.1ml。加入0.05ml10％過硫酸銨和0.01ml 的TEMED，凝膠將開始在20分鐘內開始凝固。

注：可以使用0.5M Tris-HCl, 0.4% SDS, pH 6.8的溶液替代ProtoGel Stacking Buffer。

4.選擇電泳緩衝液

Laemmli SDS-PAGE：對大多數SDS-PAGE電泳實驗來說，1X Tris-甘氨酸SDS是適合的電泳槽緩衝液。

小分子量SDS-PAGE (< 20kD)：National Diagnostics公司獨特的Tris-**基甘氨酸-SDS電泳緩衝液有效分離較小的蛋白質，而無需完全遵循Schagger- Von Jagow的方法。

ProtoGel使用**提示

風險：可能致癌。可能引起遺傳性基因損害，此外與皮膚接觸及吞食均有毒。長期吸入、與皮膚接觸或者誤吞都會對健康產生嚴重危害。

確保**：避免直接接觸，使用前需獲取**指導。如有意外發生或感覺不適，請立即就醫。

 

電泳實驗過程中可與ProtoGel 30%相配套使用的產品及其貨號

產品名稱

產品貨號

ProtoGel 30% 蛋白凝膠

EC-890

4X Resolving Buffer 分離膠緩衝液

EC-892

4X Stacking Buffer  濃縮膠緩衝液

EC-893

10X Tris Glycine SDS 電泳緩衝液

EC-870

10X Tris Tricine SDS 電泳緩衝液

EC-869

           Protein Loading Buffer Blue 2X                   蛋白上樣緩衝液（藍色）

EC-886

APS

EC-504

TEMED

EC-503

原英文版PDF  https://www.nationaldiagnostics.com/sites/default/files/ec890_protocol.pdf

 
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