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Protein A -Gold(蛋白A 膠體金試劑)
EMS(美國電子顯微鏡科學公司)長期供應電鏡級彆的膠體金(**金)標記產品。當大部分膠體金(**金)試劑在透射電子顯微鏡(TEM)上不斷應用時,它們在掃描電子顯微鏡(TEM)上的應用也取得了長足的發展,例如,金膠體可以標上抗體來確定培養細胞表麵的表麵抗原。
電鏡級彆的膠體金(**金)試劑的製備需要高質量的抗體和結合試劑,抗體一般需要經過純化處理並通過預吸附來降低非特異性反應。
Protein A -Gold (PAG)
貨號 | 保存溫度 | 粒度大小 | 規格 |
25282 | 4-8°C | EM-grade 6nm | 2.5ml |
25284 | 4-8°C | EM-grade 10nm | 2.5ml |
25286 | 4-8°C | EM-grade 15nm | 3.5ml |
25288 | 4-8°C | EM-grade 25nm | 3.5ml |
25283 | 4-8°C | EM-grade 6nm | 1.0ml |
25285 | 4-8°C | EM-grade 10nm | 1.0ml |
25287 | 4-8°C | EM-grade 15nm | 1.4ml |
25289 | 4-8°C | EM-grade 25nm | 1.4ml |
以下參數供參考:
顆粒直徑 | +-金原子數 | +-分子量(道爾頓) | +-表麵積nm2 | +-體積數nm3 | +-粒子數/ml | +-抗體分子數/粒子 |
6nm | 6500 | 1.3×106 | 113 | 113 | 2.4×1013 | 1-2 |
10nm | 30×103 | 6×106 | 315 | 525 | 5×1012 | 7-12 |
15nm | 100×103 | 20×106 | 710 | 1770 | 1.5×1012 | 25-40 |
25nm | 470×103 | 92×106 | 1970 | 8200 | 3.3×1011 | 115-180 |
每ml中的金顆粒數是大家關注的一個問題,一般來說,顆粒越大,其表麵積越大,因此可以粘結的抗體數量越多,*後可以認為一些Fab域粘結在一起,直至冇有粘結空間。有些抗體的靈敏度比彆的抗體高,這是因為它們的Fab段中的氨基酸冇有粘結,那些Fab是自由的。如果靈敏度太低,就要從彆的主體樣本中檢查抗體,因為每個的特點都不同。
蛋白質A比IgG小得多,因此蛋白質A上1nm金顆粒也少。
膠體金的顏色是大家關注的另一個話題,膠體金顆粒在5~20nm之間,吸收波長520nm,呈葡萄酒紅色,20~40·nm之間吸收波長530nm,液體為深紅色,60nm的金溶液主要吸收波長600nm,金溶液呈蘭紫色,若離心去掉較大的金顆粒,溶膠呈紅色。
抗體是怎樣與金試劑聯係起來呢?一般蛋白質加到金試劑顆粒溶液中通過以下途徑連接:a).電荷吸收(賴氨酸)b).蔬水性吸收(色氨酸)c).硫磺綁定(半胱氨酸和甲硫氨酸)
問與答:
1.我該選擇多大粒度的膠體金產品?
通常用*小的粒度來滿足你的應用。根據金標記的原理,一般較小的微粒標記產品效率更高一點。如果較小的粒度看起來困難,可以選擇銀加強實驗。非常敏感的樣品來進行掃描電鏡觀察,*好選用較大粒度的產品,這可以免去較小粒度需要加強實驗的試劑處理。
2.我該選擇PROTEIN A/G金標產品還是金標二抗產品?
這取決於你的實驗目的。應用金標二抗產品可以得到更高的標記密度。因此常說金標二抗較金標PROTEIN A更靈敏,這樣說並不**。Protein A/G識彆抗體(一抗)分子一個位點與之結合。隻有這個位點在時才發生結合,並不隨著周圍環境的不同呈現模糊圖像。
金標二抗識彆抗體(一抗)的位點不止一個,這樣抗體被檢測到的機會大大增加,大大增加了靈敏度。
如果所有的抗體(一抗)結合金標Protein A/G和金標二抗的程度一樣,那麼用金標二抗結合其上的金顆粒更多。這對於在低放大倍率下抗原的標記更為有效,換句話說,這增加了檢測能力。