文章详情

使用ProtoGel30%进行电泳实验的使用及配比说明

日期：2024-04-27 12:17

浏览次数：6906

摘要： ProtoGel 30% 丙烯酰胺：甲叉丙烯酰胺：37.5:1 纯稳定的溶液 SDS-PAGE电泳实验的方法 1.Laemmli SDS-PAGE凝胶配方使用下表来确定配置不同百分比凝胶需要的试剂量。如果您电泳的凝胶百分比未包括在该表中，使用下面的公式来计算ProtoGel、ProtoGel配套的缓冲液以及其他试剂的需要量。常用凝胶百分比中各溶液成分的量使用预混的4X Resolving Buffer 或 1.5 M Tris-HCl ...

ProtoGel 30%

丙烯酰胺：甲叉丙烯酰胺：37.5:1

纯稳定的溶液

SDS-PAGE电泳实验的方法

1.Laemmli SDS-PAGE凝胶配方

使用下表来确定配置不同百分比凝胶需要的试剂量。如果您电泳的凝胶百分比未包括在该表中，使用下面的公式来计算ProtoGel、ProtoGel配套的缓冲液以及其他试剂的需要量。

常用凝胶百分比中各溶液成分的量

使用预混的4X Resolving Buffer 或 1.5 M Tris-HCl

凝胶%

4X Resolving Buffer

1.5 M Tris-HCl

ProtoGel 30%: 20.0ml

4X Resolving Buffer: 25.0ml

去离子水: 53.9ml

ProtoGel 30%: 20.0ml

1.5 M Tris-HCl, pH 8.8: 25.0ml

10% SDS: 1.0ml

去离子水: 52.9ml

ProtoGel 30%: 26.7ml

4X Resolving Buffer: 25.0ml

去离子水: 47.2ml

ProtoGel 30%: 26.7ml

1.5 M Tris-HCl, pH 8.8: 25.0ml

10% SDS: 1.0ml

去离子水: 46.2ml

10%

ProtoGel 30%: 33.3ml

4X Resolving Buffer: 25.0ml

去离子水: 40.6ml

ProtoGel 30%: 33.3ml

1.5 M Tris-HCl, pH 8.8: 25.0ml

10% SDS: 1.0ml

去离子水: 39.6ml

12%

ProtoGel 30%: 40.0ml

4X Resolving Buffer: 25.0ml

去离子水: 33.9ml

ProtoGel 30%: 40.0ml

1.5 M Tris-HCl, pH 8.8: 25.0ml

10% SDS: 1.0ml

去离子水: 32.9ml

15%

ProtoGel 30%:50.0ml

4X Resolving Buffer: 25.0ml

去离子水: 23.9ml

ProtoGel 30%: 50.0ml

1.5 M Tris-HCl, pH 8.8: 25.0ml

10% SDS: 1.0ml

去离子水: 22.9ml

· 注：ProtoGel Resolving Buffer的使用量总是一样的，无论凝胶中单体的百分比是多少（每100ml凝胶灌制液中固定添加25mlProtoGel Resolving Buffer）。

配置任何体积浓度的凝胶灌制液中所需ProtoGel的量都可以由下列公式计算：

Vp =(X) (Vt)/30

这里，Vp = 30% ProtoGel的量，X = 凝胶中所需的单体的百分比，Vt = 灌制液的总量

比如：制作100ml单体10%的凝胶，计算要添加的ProtoGel的量如下所示：

Vp = (10) (100)/30 = 33.3 ml

2.添加引发剂和灌制胶

为了达到好的实验效果，在使用引发剂APS以及TEMED之前花10分钟真空脱除凝胶溶液中的气体。每100ml灌制液加入1.0ml10%（W/V）的过硫酸胺轻摇混合，之后每100ml灌制液加入0.1ml的TEMED轻摇混合，将溶液倾入凝胶灌制盒中，凝胶应该在10-20分钟之间开始凝固。为了避免形成不平的界面，在聚合凝固之前加入正丁醇饱和的水溶液压平界面。在灌制浓缩胶（具体操作见下一节）之前，用水将丁醇冲洗掉。

3.灌注浓缩胶

使用ProtoGel Stacking Buffer配制10ml4%的浓缩胶：ProtoGel: 1.3ml，ProtoGel Stacking Buffer: 2.5ml，去离子水: 6.1ml。加入0.05ml10％过硫酸铵和0.01ml 的TEMED，凝胶将开始在20分钟内开始凝固。

注：可以使用0.5M Tris-HCl, 0.4% SDS, pH 6.8的溶液替代ProtoGel Stacking Buffer。

4.选择电泳缓冲液

Laemmli SDS-PAGE：对大多数SDS-PAGE电泳实验来说，1X Tris-甘氨酸SDS是适合的电泳槽缓冲液。

小分子量SDS-PAGE (< 20kD)：National Diagnostics公司独特的Tris-**基甘氨酸-SDS电泳缓冲液有效分离较小的蛋白质，而无需完全遵循Schagger- Von Jagow的方法。

ProtoGel使用**提示

风险：可能致癌。可能引起遗传性基因损害，此外与皮肤接触及吞食均有毒。长期吸入、与皮肤接触或者误吞都会对健康产生严重危害。

确保**：避免直接接触，使用前需获取**指导。如有意外发生或感觉不适，请立即就医。

电泳实验过程中可与ProtoGel 30%相配套使用的产品及其货号

产品名称	产品货号
ProtoGel 30% 蛋白凝胶	EC-890
4X Resolving Buffer 分离胶缓冲液	EC-892
4X Stacking Buffer 浓缩胶缓冲液	EC-893
10X Tris Glycine SDS 电泳缓冲液	EC-870
10X Tris Tricine SDS 电泳缓冲液	EC-869
Protein Loading Buffer Blue 2X 蛋白上样缓冲液（蓝色）	EC-886
APS	EC-504
TEMED	EC-503

原英文版PDF https://www.nationaldiagnostics.com/sites/default/files/ec890_protocol.pdf

下一篇： Histo-clearII环保型组织脱蜡透明剂使用参考
上一篇： Histo-Clear II量化使用手册