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Protein G-Gold
EMS(美国电子显微镜科学公司)长期供应电镜级别的胶体金(**金)标记产品。当大部分胶体金(**金)试剂在透射电子显微镜(TEM)上不断应用时,它们在扫描电子显微镜(TEM)上的应用也取得了长足的发展,例如,金胶体可以标上抗体来确定培养细胞表面的表面抗原。
电镜级别的胶体金(**金)试剂的制备需要高质量的抗体和结合试剂,抗体一般需要经过纯化处理并通过预吸附来降低非特异性反应。
Protein G-Gold
货号 | 保存温度 | 粒度大小 | 包装 |
25313 | 4-8°C | EM-grade 6nm | 1.0ml |
25315 | 4-8°C | EM-grade 10nm | 1.0ml |
25317 | 4-8°C | EM-grade 15nm | 1.4ml |
25319 | 4-8°C | EM-grade 25nm | 1.4ml |
25312 | 4-8°C | EM-grade 6nm | 2.5ml |
25314 | 4-8°C | EM-grade 10nm | 2.5ml |
25316 | 4-8°C | EM-grade 15nm | 3.5ml |
25318 | 4-8°C | EM-grade 25nm | 3.5ml |
以下是产品参数,供参考:
颗粒直径 | +-金原子数 | +-分子量(道尔顿) | +-表面积nm2 | +-体积数nm3 | +-粒子数/ml | +-抗体分子数/粒子 |
6nm | 6500 | 1.3×106 | 113 | 113 | 2.4×1013 | 1-2 |
10nm | 30×103 | 6×106 | 315 | 525 | 5×1012 | 7-12 |
15nm | 100×103 | 20×106 | 710 | 1770 | 1.5×1012 | 25-40 |
25nm | 470×103 | 92×106 | 1970 | 8200 | 3.3×1011 | 115-180 |
每ml中的金颗粒数是大家关注的一个问题,一般来说,颗粒越大,其表面积越大,因此可以粘结的抗体数量越多,*后可以认为一些Fab域粘结在一起,直至没有粘结空间。有些抗体的灵敏度比别的抗体高,这是因为它们的Fab段中的氨基酸没有粘结,那些Fab是自由的。如果灵敏度太低,就要从别的主体样本中检查抗体,因为每个的特点都不同。
胶体金的颜色是大家关注的另一个话题,一般来说,胶体金颗粒在5~20nm之间,吸收波长520nm,呈葡萄酒红色,20~40·nm之间吸收波长530nm,液体为深红色,60nm的金溶液主要吸收波长600nm,金溶液呈兰紫色,若离心去掉较大的金颗粒,溶胶呈红色。
抗体是怎样与金试剂联系起来呢?一般蛋白质加到金试剂颗粒溶液中通过以下途径连接:a).电荷吸收(赖氨酸)b).蔬水性吸收(色氨酸)c).硫磺绑定(半胱氨酸和甲硫氨酸)
问与答:
1.我该选择多大粒度的胶体金产品?
通常用*小的粒度来满足你的应用。根据金标记的原理,一般较小的微粒标记产品效率更高一点。如果较小的粒度看起来困难,可以选择银加强实验。非常敏感的样品来进行扫描电镜观察,*好选用较大粒度的产品,这可以免去较小粒度需要加强实验的试剂处理。
2.我该选择PROTEIN A/G金标产品还是金标二抗产品?
这取决于你的实验目的。应用金标二抗产品可以得到更高的标记密度。因此常说金标二抗较金标PROTEIN A更灵敏,这样说并不**。Protein A/G识别抗体(一抗)分子一个位点与之结合。只有这个位点在时才发生结合,并不随着周围环境的不同呈现模糊图像。
金标二抗识别抗体(一抗)的位点不止一个,这样抗体被检测到的机会大大增加,大大增加了灵敏度。
如果所有的抗体(一抗)结合金标Protein A/G和金标二抗的程度一样,那么用金标二抗结合其上的金颗粒更多。这对于在低放大倍率下抗原的标记更为有效,换句话说,这增加了检测能力。