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Histo-Clear II量化使用手册
一.脱水后透明
l Histo-Clear II的透明时间可以延长至2-4小时达到更好的透明效果并且不用担心标本变硬变脆。
l 37℃比常温25℃更易于组织块的脱水后透明并且节省试剂的用量和处理的时间。
l 在Histo-Clear II透明前还可以增加无水异丙醇步骤(去除痕量水)从而减少Histo-Clear II的用量。
l 一般来说2.5L-3L Histo-Clear II可以处理1250-1500个组织块,具体数量可能视组织块的大小厚薄而发生变化,各实验室可在这个基础上摸索出适合自己的处理通量。
l 达到试剂处理量上限时应及时更换,更换可以采用前移法,大程度增加透明剂的利用度和保证组织处理的效果。所谓前移法是指,通常的脱水后透明含有三道Histo-Clear II透明处理,当一道Histo-Clear II达到处理上限时,将一道透明剂溶液弃去,后续的两道透明剂溶液依次前移,而在后一道换上新鲜的透明剂。
二.脱蜡
l Histo-Clear II的脱蜡时间视温度和组织切片的类型厚薄(3µm or 4µm)而定,一般来说室温25℃时,2-3道脱蜡总时长在10min-50min可以保证脱蜡完全。
l 以4µm切片为例,500ml Histo-Clear II大致可以处理700张片子左右,更细化的数字还需视各实验室的具体情况而定。推荐通过预实验掌握Histo-Clear II对自己工作中所使用的石蜡的溶解速率,从而科学的量化每道Histo-Clear II的使用体积、处理时间以及更换的时机。
l 更换同样可以采用前移法来节省用量。
三.染色后透明
与脱蜡基本类似也受温度、切片厚薄等因素影响,一般2-3道,每道5-10min。以4µm切片为例,500ml Histo-Clear II大致可以处理750张片子左右,具体处理量可以自己摸索后确定。更换仍然可以采用前移法,既不影响透明效果也可以节省试剂用量。