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使用ProtoGel30%进行电泳实验的使用及配比说明

日期:2020-06-26 15:17
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摘要: ProtoGel 30% 丙烯酰胺:甲叉丙烯酰胺:37.5:1 超纯稳定的溶液 SDS-PAGE电泳实验的方法 1.Laemmli SDS-PAGE凝胶配方 使用下表来确定配置不同百分比凝胶需要的试剂量。如果您电泳的凝胶百分比未包括在该表中,使用下面的公式来计算ProtoGel、ProtoGel配套的缓冲液以及其他试剂的需要量。 常用凝胶百分比中各溶液成分的量 使用预混的4X Resolving Buffer 或 1.5 M Tris-HCl ...
 ProtoGel  30%

丙烯酰胺:甲叉丙烯酰胺:37.5:1

超纯稳定的溶液

 

SDS-PAGE电泳实验的方法

1.Laemmli SDS-PAGE凝胶配方

使用下表来确定配置不同百分比凝胶需要的试剂量。如果您电泳的凝胶百分比未包括在该表中,使用下面的公式来计算ProtoGelProtoGel配套的缓冲液以及其他试剂的需要量。

常用凝胶百分比中各溶液成分的量

使用预混的4X Resolving Buffer  1.5 M Tris-HCl

凝胶%

4X Resolving Buffer

1.5 M Tris-HCl

6%

 ProtoGel 30%: 20.0ml

 4X Resolving Buffer: 25.0ml

 去离子水: 53.9ml

ProtoGel 30%:  20.0ml

1.5 M Tris-HCl, pH 8.8:  25.0ml

10% SDS:   1.0ml

去离子水:  52.9ml

8%

ProtoGel 30%: 26.7ml

 4X Resolving Buffer: 25.0ml

 去离子水: 47.2ml

ProtoGel 30%:  26.7ml

1.5 M Tris-HCl, pH 8.8:  25.0ml

10% SDS:   1.0ml

          去离子水:  46.2ml

10%

ProtoGel 30%: 33.3ml

 4X Resolving Buffer: 25.0ml

 去离子水: 40.6ml

ProtoGel 30%:  33.3ml

1.5 M Tris-HCl, pH 8.8:  25.0ml

10% SDS:   1.0ml

          去离子水:  39.6ml

12%

ProtoGel 30%: 40.0ml

 4X Resolving Buffer: 25.0ml

 去离子水: 33.9ml

ProtoGel 30%:  40.0ml

1.5 M Tris-HCl, pH 8.8:  25.0ml

10% SDS:   1.0ml

          去离子水:  32.9ml

15%

ProtoGel 30%:50.0ml

 4X Resolving Buffer: 25.0ml

 去离子水: 23.9ml

ProtoGel 30%:  50.0ml

1.5 M Tris-HCl, pH 8.8:  25.0ml

10% SDS:   1.0ml

          去离子水:  22.9ml

 

·         注:ProtoGel Resolving Buffer的使用量总是一样的,无论凝胶中单体的百分比是多少(每100ml凝胶灌制液中固定添加25mlProtoGel Resolving Buffer)。

配置任何体积浓度的凝胶灌制液中所需ProtoGel的量都可以由下列公式计算:

Vp =(X) (Vt)/30

这里,Vp = 30% ProtoGel的量,X = 凝胶中所需的单体的百分比,Vt = 灌制液的总量

比如:制作100ml单体10%的凝胶,计算要添加的ProtoGel的量如下所示:

Vp = (10) (100)/30 = 33.3 ml

2.添加引发剂和灌制胶

为了达到*佳的实验效果,在使用引发剂APS以及TEMED之前花10分钟真空脱除凝胶溶液中的气体。每100ml灌制液加入1.0ml10%W/V)的过硫酸胺轻摇混合,之后每100ml灌制液加入0.1mlTEMED轻摇混合,将溶液倾入凝胶灌制盒中,凝胶应该在10-20分钟之间开始凝固。为了避免形成不平的界面,在聚合凝固之前加入正丁醇饱和的水溶液压平界面。在灌制浓缩胶(具体操作见下一节)之前,用水将丁醇冲洗掉。

3.灌注浓缩胶

使用ProtoGel Stacking Buffer配制10ml4%的浓缩胶:ProtoGel: 1.3mlProtoGel Stacking Buffer:  2.5ml,去离子水: 6.1ml。加入0.05ml10%过硫酸铵和0.01ml TEMED,凝胶将开始在20分钟内开始凝固。

注:可以使用0.5M Tris-HCl, 0.4% SDS, pH 6.8的溶液替代ProtoGel Stacking Buffer

4.选择电泳缓冲液

Laemmli SDS-PAGE对大多数SDS-PAGE电泳实验来说,1X Tris-甘氨酸SDS是*适合的电泳槽缓冲液。

小分子量SDS-PAGE (< 20kD)National Diagnostics公司独特的Tris-三甲基甘氨酸-SDS电泳缓冲液有效分离较小的蛋白质,而无需完全遵循Schagger- Von Jagow的方法。

ProtoGel使用安全提示

风险:可能致癌。可能引起遗传性基因损害,此外与皮肤接触及吞食均有毒。长期吸入、与皮肤接触或者误吞都会对健康产生严重危害。

确保安全:避免直接接触,使用前需获取专业指导。如有意外发生或感觉不适,请立即就医。

 

电泳实验过程中可与ProtoGel 30%相配套使用的产品及其货号

产品名称

产品货号

ProtoGel 30% 蛋白凝胶

EC-890

4X Resolving Buffer 分离胶缓冲液

EC-892

4X Stacking Buffer  浓缩胶缓冲液

EC-893

10X Tris Glycine SDS 电泳缓冲液

EC-870

10X Tris Tricine SDS 电泳缓冲液

EC-869

           Protein Loading Buffer Blue 2X                   蛋白上样缓冲液(蓝色)

EC-886

APS

EC-504

TEMED

EC-503

原英文版PDF  https://www.nationaldiagnostics.com/sites/default/files/ec890_protocol.pdf

 

沪公网安备 31010902002433号